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CUT-Tag技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作

更新時(shí)間:2024-07-02

訪(fǎng)問(wèn)量:1781

廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家

生產(chǎn)地址:

簡(jiǎn)要描述:
CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)是研究DNA與蛋白互作的新技術(shù)。與ChIP-Seq相比,CUT-Tag不需要甲醛交聯(lián)和免疫共沉淀的過(guò)程,而是通過(guò)靶蛋白的抗體和Protein A的介導,使Protein A融合的Tn5轉座酶靶向并切割DNA,同時(shí)在序列兩端加上測序接頭,經(jīng)PCR擴增后形成高通量測序文庫。
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CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是研究DNA與蛋白互作的新技術(shù)。與ChIP-Seq相比,CUT&Tag不需要甲醛交聯(lián)和免疫共沉淀的過(guò)程,而是通過(guò)靶蛋白的抗體和Protein A的介導,使Protein A融合的Tn5轉座酶靶向并切割DNA,同時(shí)在序列兩端加上測序接頭,經(jīng)PCR擴增后形成高通量測序文庫。

CUT-Tag互作技術(shù)服務(wù)-研究DNA與蛋白互作實(shí)驗流程圖

CUT&Tag流程圖.png

細胞與ConA beads結合——細胞滲透性處理——一抗與目的蛋白特異性結合——二抗結合一抗放大信號——加入pA-Tn5與抗體結合——通過(guò)Mg2+激活轉座體,片段化目的蛋白結合的DNA,并加上接頭序列——DNA提取與擴增-高通量測序

 

客戶(hù)提供材料 實(shí)驗過(guò)程圖

凍存細胞:細胞數>10萬(wàn)

凍存組織:組織量>40 mg

一抗(請使用ChIP級別的一抗,提供未稀釋的抗體原液,

送樣前請將抗體的說(shuō)明書(shū)發(fā)給我們,以便安排后續實(shí)驗

高通量測序原始數據

生物信息學(xué)分析結果

 

使用CUT&Tag,鑒定H3K27me3在染色質(zhì)水平上的peaks。與ChIP-seq相比,在相同Reads條件下,兩者的Peaks一致,并且CUT&Tag的信噪比更高、背景更低。


參考文獻:

Kaya-Okur HS, Wu SJ, Codomo CA, Pledger ES, Bryson TD, Henikoff JG, Ahmad K, Henikoff S. CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nat Commun. 2019 Apr 29;10(1):1930. doi: 10.1038/s41467-019-09982-5.

 

CUT&Tag,DAP-seq,ChIP-seq技術(shù)對比
技術(shù)名稱(chēng) CUT&Tag DAP-seq ChIP-seq
實(shí)驗模式 體內 體外 體內
是否需要特異性抗體
樣本適用性 對細胞活性要求高,不兼容冷凍樣本,能夠對極少量樣品進(jìn)行分析 所有物種,各種組織器官,新鮮組織、凍存組織皆可 所有物種,各種組織器官,新鮮組織、凍存組織皆可
信噪比 背景噪音低,所需測序深度少 噪音高,所需測序量相對較多 噪音高,所需測序量相對較多

 

 

 

 

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